試驗研究應(yīng)用超聲波破碎蘇云金芽孢桿菌試驗魏萬勇1蘇智先2（1.四川省蠶絲學(xué)校，四川南充637000 2.西華師范大學(xué)，四川南充637000）結(jié)果表明：在試驗條件下，超聲波破碎達到95%以上的破碎率所需時間為30~ 50min，尤其是菌液濃度為每毫升50億，用510變幅桿破碎，40min破碎率可達99.9%.而細菌的芽孢，無論是采用幅桿*6或510，其破碎效果不明顯。

　　Bt）是農(nóng)業(yè)上研究最多，應(yīng)用最廣的一類微生物，隨著生物技術(shù)的發(fā)展，對蘇云金芽孢桿菌的研究越來越深入。在一些研究中，需要有效地破碎蘇云金芽孢桿菌細胞。目前，應(yīng)用于細胞破碎的方法有物理和化學(xué)的兩類，在物理破碎方法中主要有玻璃勻漿器破碎、高壓細胞破碎、液氮破碎、高速組織搗碎機破碎、超聲波破碎等，本試驗應(yīng)用了常用的超聲波破碎法，分別對蘇云金芽孢桿菌的營養(yǎng)細胞和芽孢進行了破碎試驗，以期對研究有所幫助。

　　1材料和方法1.1材料收入少，可采取二次分配和風險基金的辦法3.2分析生產(chǎn)彈性、合理調(diào)控蠶繭的生產(chǎn)供應(yīng)量。不管是米取價格鼓動、宣傳鼓動還是行政推動都要適度，避免出現(xiàn)一哄而上搞蠶繭大戰(zhàn)，到最后兩敗俱傷。

　　蠶業(yè)生產(chǎn)由傳統(tǒng)生產(chǎn)型向產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)轉(zhuǎn)變是繭絲綢行業(yè)發(fā)展的必然趨勢，也是推進產(chǎn)業(yè)化進程的標志和目標。我們只有以體制創(chuàng)新為突破，依托/公司+農(nóng)戶“的蠶業(yè)化經(jīng)營模式，增強農(nóng)民在產(chǎn)業(yè)中的主體地位，使農(nóng)民真正成為生產(chǎn)經(jīng)營的市場主體和整個產(chǎn)業(yè)的受益主體，從而使廣大蠶農(nóng)脫貧致富奔小康，為建設(shè)社會主義新農(nóng)村奠定基礎(chǔ)。

　　蘇云金芽孢桿菌為四川省蠶絲學(xué)校微生物實驗室保存。

　　7532，做菌種復(fù)壯用。

　　超聲波破碎機由寧波新芝生物科技股份有限公司生產(chǎn)。

　　電熱恒溫培養(yǎng)箱、冰箱、高壓滅菌鍋、平皿、克氏瓶、吸管、試管等。

　　牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基（營養(yǎng)瓊脂）。

　　將冷凍菌種接種于牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基培養(yǎng)18~20h，給2、3齡起蠶添食，待蠶兒發(fā)病死亡后，進行細菌分離和鑒定，確認為家蠶猝倒病病原一蘇云金芽孢桿菌猝倒亞種。

　　試驗用液的制備：復(fù)壯種一定量接種于營養(yǎng)瓊脂克氏瓶中，恒溫37*C分別培養(yǎng)14h和24h，用適量生理鹽水洗下菌苔，配制成試驗所需濃度，4*C冰箱保存。

　　1培養(yǎng)14h細胞液的破碎取培養(yǎng)14h的試驗用菌液200ml選擇56，510的變幅桿，應(yīng)用工作5s休息5s的運行模式，對不同濃度的菌液實際破碎10、20、30、40、50min后，進行活菌計數(shù)。

　　24小時的試驗用菌液的200ml選擇56，510的變幅桿，運用工作5s休息5s的運行模式，對不同濃度的菌液實際破碎10、20、30、40、50、60min后，進行活菌計數(shù)。

　　參照《微生物實驗手冊》中介紹的方法進行活菌計數(shù)，無論是培養(yǎng)14h還是24h的菌液都是在6h內(nèi)結(jié)束超聲波破碎試驗，不考慮細菌的自然死亡。

　　2.1培養(yǎng)14h的蘇云金芽孢桿菌菌液破碎結(jié)果表1培養(yǎng)14h菌液的破碎結(jié)果變幅桿5菌液濃度工作時間平均活菌率平均破碎率（％）*隨著工作時間的增加，肉眼觀察可見菌液濁度降低而透明度增加。

　　不同的細菌濃度，用同樣的變幅桿（56或510），在相同的工作時間內(nèi)，50億/ml的破碎率比100億/ml的高1.75~8個百分點；相同的細菌濃度（50億/ml或100億/ml），用不同的變幅桿（56和510）達到相同的破碎率時間基本在10min左右，但無論用56或510的變幅桿，還是50億/ml或100億/ml的細菌濃度，達到95%以上破碎率所需用時間在50min內(nèi)。

　　2.2培養(yǎng)24h的蘇云金芽孢桿菌菌液破碎結(jié)果度，也無論用56或510的變幅桿，在30~60min的工作時間內(nèi)，菌液的破碎率在6. 5~12%之間，如考慮到培養(yǎng)24h蘇云金芽孢桿菌菌液內(nèi)的少部分（約10%左右）營養(yǎng)細胞和計算誤差外，完全可以認為超聲波對培養(yǎng)24h蘇云金芽孢桿菌芽孢的破碎無明顯效果。

　　表2培養(yǎng)24h菌液的破碎結(jié)果變幅桿5菌液濃度工作時間平均活菌率平均破碎率（％）*隨著工作時間的增加，肉眼觀察可見菌液濁度無明顯變化。

　　隨著生物工程技術(shù)的發(fā)展，蘇云金芽孢桿菌的應(yīng)用正變得越來越廣，而找到其有效的破碎方法，具有非常重要的理論和實踐意義。在實驗和研究工作中我們常用超聲波來破碎細胞以分離細胞成分或用于免疫化學(xué)研究。本次試驗表明，雖然能否形成芽孢是菌種的遺傳特性，但是同時也與環(huán)境條件如培養(yǎng)時間、營養(yǎng)條件等有關(guān)系。對于培養(yǎng)14h還沒有產(chǎn)生芽孢的蘇云金芽孢桿菌菌液來說，超聲波破碎法在試驗條件下，無論選用*6變幅桿還是直徑相對較大的510變幅桿，也無論菌體濃度是50億/ml，還是100億/ml，達到95%以上的破碎率所需時間為30~ 50min，破碎效果較為理想；然而對于培養(yǎng)24h已經(jīng)產(chǎn)生芽孢的蘇云金芽孢桿菌菌液來講，菌液中既有芽孢，還有部分營養(yǎng)細胞，從表2可以看出，破碎率均較低，超聲波破碎法的效果是極不顯著的。

　　超聲波是振動頻率超過2萬Hz的聲波。

　　它能通過強烈的振動使細胞破裂，細胞內(nèi)含物外泄而死亡。超聲波的破碎效果與處理功率、頻率、次數(shù)、時間、微生物類型及其生理狀態(tài)等因素有關(guān)。芽孢的抗逆性強，幾乎不受超聲波處理的影響，故芽孢的破碎宜用其它方法。本次實驗表明：應(yīng)用超聲波處理蘇云金芽孢桿菌應(yīng)特別注意該菌培養(yǎng)時間、培養(yǎng)條件和生物狀態(tài)。

　　本次實驗采用非滅活細胞破碎，對環(huán)境的要求較為嚴格，但通過細菌計數(shù)，可以比較明確地掌握各個時間段的細胞（包括休眠細胞-芽孢）破碎情況，至于滅活的蘇云金芽孢桿菌菌體及其芽孢最佳的破碎方法和破碎情況，尚有待進一步研究。