超聲波破碎在植物SOD提取中的應(yīng)用大連民族學(xué)院生物工程系2001級馮艷偉，于琳琳，艾勇SOD即超氧化物歧化酶，是一種廣泛存在于動植物及微生物體中的金屬酶，能催化超氧負(fù)離子發(fā)生歧化反應(yīng)，有效清除機(jī)體內(nèi)的超氧自由基，對生物體有保護(hù)作用，因而具有抗輻射，抗腫瘤及延緩機(jī)體衰老等功能。本實(shí)驗(yàn)以大蒜為原料，對超聲波破碎進(jìn)行了研究，與傳統(tǒng)破碎方法相比，SOD總收率有所提高，并取得了最佳破碎條件。

　　1材料與方法1.1材料與試劑。新鮮蒜瓣（市售）；三羥甲基胺基甲烷、鄰苯三酚、乙二胺四乙酸、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、氯化氫、丙酮等化學(xué)試劑均為分析純。

　　1.2儀器。TDL*50B低速臺式大容量離心機(jī)、DS*高速組織勻漿機(jī)、752紫外可見分光光度計(jì)、JY92―丨丨超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)、TA2104H電子天平。

　　1.3實(shí)驗(yàn)方法1.3.1超聲波破碎功率及破碎時間的確定取新鮮蒜瓣，去皮洗凈，用勻漿機(jī)勻漿1.5mm，分別分成6組、8組，每組30g，取6組分別用200450W功率超聲波破碎4min，另取8組按上述確定的功率破碎07.0min，在每組蒜汁中加入1.5倍體積0.05MpH7.8的磷酸緩沖液，浸提8h（4*C），離心得浸提液，測定浸提液中的總蛋白含量及總酶活性，取三次的平均值。

　　1.3.2分析方法SOD酶活的測定：采用鄰苯三酚自氧化法測定。SOD酶活性單位的定義：在1mL反應(yīng)液中每分鐘抑制鄰苯三酚自氧化速率50%時的酶量為一個酶活單位?？偟鞍诐舛葴y定：在浸提液中加入1.2倍體積冷丙酮（4*C），離心得沉淀，冷凍千燥后，用天平稱量。

　　2結(jié)果與討論2.2超聲波破碎時間對SOD的提取率及活性的影響在一定的功率下，考察不同破碎時間所得浸提液的總蛋白含量和總酶活性。在03min時總蛋白含量基本接近，總酶活及比活基本不變，說明破碎的細(xì)胞數(shù)量沒有增多，SOD的活性也沒有損失；在37min時總蛋白含量提高了5%左右，但在6mn后酶的比活有所下降，說明超聲波使部分酶失活，由可以得出，最佳破碎時間為破碎時間對SOD提取率及活性的影響3結(jié)論通過對從大蒜中抽提SOD工藝的研究發(fā)現(xiàn)，用超聲波破碎細(xì)胞可使SOD的收率提高3%5*%，最佳破碎條件為300W、5min（不同植物最佳條件會有所差異）。

　　2.1超聲波破碎功率對SOD的提取率及活性的影響在相同時間內(nèi)，考察不同功率下的破碎情況。在0250W時，總蛋白含量與比活性基本不變，說明超聲波對細(xì)胞破碎及酶活性作用不很明顯；在300450W時，總蛋白含量有所提高，但在350450W時，酶的比活有下降趨勢，說明酶的活性有損失，由可以得出，最佳破碎功率為300W.